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LeapWal PolyShooter 转染试剂 P09110 使用方法

更新时间:2023-02-20 点击量:627
  LeapWal PolyShooter 转染试剂 P09110 是基于PEI(Polyethylenimine)的产品,因其有效的瞬转效率和蛋白产量,已广泛应用于工业化生产和基础科研中的蛋白表达研究,年文献发表量已达上千篇。PEI是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔二个碳原子,即每“第三个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”(proton sponge)体。PEI用作转染试剂,将DNA缩聚成带正电荷的复合物,这些复合物很容易通过内吞作用进入细胞。PEI-DNA复合物能很好地抵御溶酶体的降解作用,提高转染效率。PEI转染试剂能有效地将DNA转染入HEK-293、CHO、COS、Hela、昆虫(SF9、SF21)等真核细胞系,也可用于较大质粒的转染。Polysciences目前主推三款不同市场定位的PEI转染试剂。
 
  LeapWal PolyShooter 转染试剂 P09110转染步骤:转染前一天将细胞分至培养板,转染当天细胞应50-80%融合。将细胞以1-3×105/2 ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。
 
  1. 在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6,直至总体积到100 ul。
 
  2. 将3-6 ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液,轻弹管壁混合。
 
  3. 加入1-2 ug的DNA溶液(0.02-2.0 ug/ul),轻弹管壁混合。
 
  4. 室温孵育20分钟。
 
  5. 将6孔板中的旧营养液吸出,加入约1 ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次,再加入2 ml不含血清和双抗的营养液。
 
  6. 将转染复合物加入细胞,混匀使之均匀分布。
 
  7. 3-8小时后,加入血清或换成含血清的营养液。