Polybrene (10 mg/mL)
Catalog Number：LE110
01/产品概述
Polybrene（聚凝胺，hexadimethrine bromide）是一种多聚阳离子聚合物，广泛用于逆转录病毒及慢病毒介导的基因转染，是一种常用的促感染试剂，能够显著提高病毒与细胞的接触及感染效率，其作用机理可能是通过中和细胞表面唾液酸与病毒颗粒之间的静电排斥从而促进吸附作用。同时，Polybrene也常用于哺乳动物细胞的DNA转染实验以增强脂质体的转染效率。Polybrene也是一种有名的抗肝素剂（肝素拮抗剂），常用来生产非特异性凝集的红细胞。它还参与到低分子量DNA的转化中。此外，Polybrene也多用于蛋白测序，因为小剂量的Polybrene在自动测序分析可明显改善多肽的降解现象。PVDF膜加入polybrene还能提高膜的亲和性。
本产品以溶液形式提供，粉末用 0.9% NaCl 配制成10 mg/mL的溶液，并用0.22 μm滤膜过滤除菌。使用时一般按1:1000-1:5000稀释，依细胞种类不同稀释比例不同，具体使用浓度请查阅相关文献。
02/产品组分
03/保存条件
冰袋（wet ice）运输。-20℃ 保存，有效期24个月。建议分装保存，避免反复冻融。
04/产品特点
v 即用型试剂，无需进行试剂配置，简单方便。
v 无菌制剂，可直接加入细胞使用。
05/实验步骤
慢病毒感染（Lentiviral Infection）实验步骤如下：
1. 包装慢病毒并测定慢病毒滴度，通过病毒滴度和MOI计算目的细胞感染所需的病毒量。
2. 实验前一天，将生长状态良好的目的细胞消化计数后稀释至1-3×105/mL，加入12孔板，1 mL/孔。放入37℃，5% CO2培养箱中培养。
Ø 悬浮细胞不需要提前一天接种，实验前将细胞计数接种后，直接加入病毒混合液即可。
3. 配制慢病毒+polybrene+培养基混合液。polybrene一般使用浓度为2-10 μg/mL，但对某些细胞（如末端分化的神经元，DC细胞等）毒性较大，初次使用建议先做毒性测试。
4. 吸去12孔板中目的细胞的培养基，加入3中配制的慢病毒混合液，放入37℃，5% CO2 培养箱中继续培养。
Ø 感染悬浮细胞或半悬浮细胞，则需采用平角离心转染法，即将适量的病毒液加入细胞培养板后，封好口，放入平角离心机中，低速（200xg）离心 1 h ，然后放入培养箱中继续培养。
Ø 若实验条件有限，没有平角离心机，可用离心管代替，将细胞吸入离心管中，进行低速离心，去掉大部分上清，加入适量的病毒液，室温放置 15 min，然后将细胞和病毒液同时吸出转入培养板中继续培养。
5. 病毒感染16 h后更换为新鲜培养基继续培养。
6. 病毒感染36-48 h后，可加入筛选培养基进行稳定细胞株筛选，或采用荧光显微镜、流式细胞术、western blot、qPCR等方法检测目的基因表达情况。
06/适用范围
Polybrene目前广泛用于逆转录病毒及慢病毒介导的基因转染，是一种常用的促感染试剂，能够显著提高病毒与细胞的接触及感染效率。
07/注意事项
1. Polybrene对某些细胞（如末端分化的神经元、DC 细胞）毒性较大，初次应用建议先做毒性测试。
2. 本说明书中提供的Polybrene使用浓度范围仅供参考，具体使用浓度请参考相关文献。
3. 为了您的健康安全，请规范操作，穿戴实验服与手套开展实验。
4. 所有慢病毒操作均需在BSL2级生物安全柜中进行。
5. 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及治疗。
08/实验案例分析
1. 提前一天使用10 cm细胞培养皿培养ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line（CL110001），待细胞密度为75% 左右开始包装慢病毒。
2. 使用ViralStars LP Lentivirus Packaging Kit（LP110-10）进行慢病毒包装。取10 μL慢病毒包装辅助质粒混合物（Package Plasmid Mix）加入到2 mL离心管中，加入2.5 μL表达GFP 的对照质粒（Control Plasmid），轻轻混合，加入32 μL PolyShooter转染试剂与质粒混合，室温孵育3分钟。
3. 往上述混合物中加入1.8 mL无血清无双抗的DMEM基础培养基，轻轻混匀，在室温下静置30分钟，形成转染试剂-核酸复合物。
4. 将上述1.8 mL转染试剂-核酸复合物轻轻地逐滴均匀加入10 cm皿慢病毒包装细胞中，轻轻摇动培养皿混匀，置于37℃，5% CO2培养箱中培养产毒。
5. 转染24 h后，弃去初始病毒上清液，加入10 mL新鲜的*培养基(DMEM +10% FBS)至10 cm细胞培养皿中，置于37℃，5% CO2培养箱继续培养。
6. 转染48 h后，收集病毒上清液，再加入10 mL新鲜的*培养基(DMEM +10% FBS)至10 cm细胞培养皿中，置于37℃，5% CO2培养箱继续培养。
7. 转染72 h后，进行二次病毒上清液收集，与48 h收集的上清液混合后，300xg离心10分钟以除去细胞碎片，0.22 μm滤器过滤，使用ViralStars LC Lentivirus Concentration Solution慢病毒浓缩试剂盒（LC110R）进行20倍浓缩，使用1 mL ViralStars LS Lentivirus Storage Solution（LS110R）重悬慢病毒颗粒。
8. 使用上述制备的慢病毒感染目的细胞HEK293T，设置两组实验组: (1) 病毒+polybrene (10 μg/mL)+培养基混合液，(2) 病毒+培养基混合液(不添加polybrene)。
9. 使用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况，并拍照记录。使用流式细胞术统计GFP阳性细胞数，实验结果如图2所示。
图2: 慢病毒(GFP)感染目的细胞HEK293T的过程中是否添加polybrene (10 μg/mL)的感染效率对比实验。
09/其他相关产品
