浅析LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 转染试剂 P09310 转染步骤

　　LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 转染试剂 P09310 综合了低的细胞毒性和高的转染效率，让更多细胞存活，且带来生理上更相关的结果。而且，转染步骤也相当简单：只需用无血清培养基稀释转染试剂，与质粒共同孵育，然后逐滴加入细胞中。研究人员所需的优化少，当然，在转染之前，你还是得优化转染试剂与DNA的比例。建议的比例是3:1，但对于特定研究，2:1至7:1的比例可能会提高转染效率。
 

　　LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 转染试剂 P09310 步骤：
 

　　1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95%。细胞铺板在2ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
 

　　2.对于每孔细胞，使用250ul无血清培养基(如OPTI-MEMI培养基)稀释4.0ugDNA，轻轻混匀。
 

　　3.使用前将Lipofectamine2000转染试剂轻轻混匀，用250ul无血清培养基(如OPTI-MEMI培养基)稀释10ulLipofectamine2000转染试剂，轻轻混匀。Lipofectamine2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合(<30分钟)。NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。
 

　　4.混合稀释的DNA(第二步)和稀释的Lipofectamine2000(第三步)。室温放置20分钟。
 

　　5.(optional)将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。加入2ml无血清配养基。
 

　　6.直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
 

　　7.在37℃，5%CO2中保温24-48小时。无需去掉复合物或更换培养基。或者在4-5小时后更换培养生长基也不会降低转染活性。
 

　　8.在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。