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浅析LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 转染试剂 P09310 转染步骤

发布时间:2023-01-16 点击量:22
  LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 转染试剂 P09310 综合了低的细胞毒性和高的转染效率,让更多细胞存活,且带来生理上更相关的结果。而且,转染步骤也相当简单:只需用无血清培养基稀释转染试剂,与质粒共同孵育,然后逐滴加入细胞中。研究人员所需的优化少,当然,在转染之前,你还是得优化转染试剂与DNA的比例。建议的比例是3:1,但对于特定研究,2:1至7:1的比例可能会提高转染效率。
 
  LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 转染试剂 P09310 步骤:
 
  1.转染前一天,胰酶消化细胞并计数,细胞铺板,使其在转染日密度为90-95%。细胞铺板在2ml含血清,不含抗生素的正常生长的培养基中。
 
  2.对于每孔细胞,使用250ul无血清培养基(如OPTI-MEMI培养基)稀释4.0ugDNA,轻轻混匀。
 
  3.使用前将Lipofectamine2000转染试剂轻轻混匀,用250ul无血清培养基(如OPTI-MEMI培养基)稀释10ulLipofectamine2000转染试剂,轻轻混匀。Lipofectamine2000稀释后,在5分钟内同稀释的DNA混合(<30分钟)。NOTE:若使用DMEM培养基,则需在5分钟内同稀释的DNA混合。
 
  4.混合稀释的DNA(第二步)和稀释的Lipofectamine2000(第三步)。室温放置20分钟。
 
  5.(optional)将6孔板中的旧营养液吸出,用无血清培养基清洗两次。加入2ml无血清配养基。
 
  6.直接将复合物加入到每孔中,摇动培养板,轻轻混匀。
 
  7.在37℃,5%CO2中保温24-48小时。无需去掉复合物或更换培养基。或者在4-5小时后更换培养生长基也不会降低转染活性。
 
  8.在细胞中加入复合物24-72小时后,分析细胞抽提物或进行原位细胞染色,检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达,在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中,两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。
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