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LeapWal PolyShooter 转染试剂 P09110转染步骤

发布时间:2022-07-19 点击量:127
  LeapWal PolyShooter 转染试剂 P09110的原理时带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成复合物通过细胞内吞噬作用而使DNA转导进入细胞核。此法只适合瞬时转染实验,转染效率与DEAE-葡聚糖的浓度以及细胞与DNA/EDAE-葡聚糖混合液接触时间的长短有关,可采用较高浓度的DEAE-葡聚糖(1g/L)作用较短时间(0.5-1.5h),也可用较低浓度(250mg/L)的DEAE-葡聚糖坐拥较长时间(8h)。
 
  脂质体是由脂质双分子层组成的、内部为水相的封闭囊泡结构。脂质体的水相可以包裹多种物质。DNA与脂质体混合后可被包裹在脂质体的水相中。当脂质体与转染的细胞的细胞膜接触时。其脂质双分子层与细胞膜融合,脂质体水相中的DNA进入细胞内部,细胞被转染。
 
  LeapWal PolyShooter 转染试剂 P09110 转染步骤:
  1.转染前一天,胰酶消化细胞并计数,细胞铺板,使其在转染日密度为90-95%。细胞铺板在2ml含血清,不含抗生素的正常生长的培养基中。
  2.对于每孔细胞,使用250ul无血清培养基(如OPTI-MEMI培养基)稀释4.0ugDNA轻轻混匀。
  3.使用前将PolyShooterP09110转染试剂轻轻混匀,用250ul无血清培养基(如OPTI-MEMI 培养基)稀释10ulPolyShooterP09110转染试剂,轻轻混匀。PolyShooterP09110稀释后,在5分钟内同稀释的DNA昆合(<30分钟)。NOTE 若使用DME培养基,贝U需在5分钟内同稀释的DNA昆合。
  4.混合稀释的DNA(第二步)和稀释的PolyShooterP09110(第三步)。室温放置20分钟。
  5.(optional)将6孔板中的旧营养液吸出,用无血清培养基清洗两次。加入2ml无血清配养基。

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