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ViralStars LC Lentivirus Concentration Solution (5x) LC110R

发布时间:2022-06-18 点击量:405

ViralStarsTM LC

Lentivirus Concentration Solution

(5x)

Catalog Number:LC110R


01/产品概述


基于人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的慢病毒载体是一种用于基因转移研究的载体。慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面,慢病毒载体可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,使用慢病毒载体能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主细胞基因组的几率大大增加,能够比较方便快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。在体外实验及体内实验的研究中,慢病毒己经成为表达外源基因或外源shRNA的常用载体形式之一,并且正在获得越来越广泛的应用。


ViralStars LC Lentivirus Concentration Solution慢病毒浓缩试剂是针对慢病毒富集而优化的聚合物材料,它提供了一种简单、快速、高效的慢病毒颗粒浓缩方法。只需将慢病毒上清液与慢病毒浓缩试剂按比例混合,短时间孵育,采用标准离心机进行离心即可得到慢病毒颗粒沉淀。超滤、超速离心法等病毒浓缩法,操作时间长,步骤繁琐,且通常会有细胞碎片和血清蛋白等的污染,病毒纯度低。使用本产品进行病毒浓缩后,病毒滴度可提高10-100倍,病毒回收率最高可达约90%,病毒损失少,并且病毒在浓缩过程中能保持病毒生物活性。整个实验过程可在 4 小时内快速完成,无需超速离心即可获得出色的回收效率。



02/产品组分

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03/保存条件


冰袋(wet ice)运输。4℃ 保存,有效期12 个月。



04/产品特点


* 简单快速——操作简单,无需超速离心,确保活性,实验耗时不超过4小时

* 浓缩效果优——病毒滴度可浓缩10-100倍以上(Transduction Units/mL)

* 回收效率高——慢病毒回收效率高达 90% 以上

* 应用范围广——适用于所有类型的慢病毒颗粒



05/实验流程概要

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06/实验步骤


1. 将含有慢病毒颗粒的培养基转移至无菌容器中,300xg离心10分钟以除去细胞碎片。

Ø 为保证病毒活性,浓缩前的病毒上清液应尽量选择新鲜收集的病毒原液。

2. 使用0.22μm过滤器过滤上清液至无菌容器中。

Ø 如果使用滤膜过滤,推荐使用低蛋白结合力的纤维素醋酸酯或聚醚砜(PES)膜,不推荐使用硝酸纤维素膜(NC)。

3. 向每4体积含慢病毒的上清液中加入1体积慢病毒浓缩试剂(5x),使慢病毒浓缩试剂(5x)稀释为工作浓度(1x)。

4. 将上述混合物于4℃ 摇床中慢速孵育3小时或过夜。

Ø 慢病毒颗粒在 4℃ 可稳定长达4天。

5. 将混合物4℃ 4000 x g 离心25分钟。离心后,慢病毒颗粒可能在容器底部显示为米色或白色沉淀。

6. 小心弃去上清液,4℃ 4000 x g 离心5分钟,再次弃尽残余液体,应尽量避免吸走沉淀物,该沉淀物即为慢病毒颗粒。

7. 用初始体积(原上清液体积)1/10 -1/100 预冷的慢病毒保存液重悬病毒颗粒,使用移液器小心吹打,重悬慢病毒颗粒。

Ø 重悬病毒沉淀时,吹打操作要轻柔,可选择慢病毒保存液(LS110R)、*培养基或FBS重悬慢病毒。

8. 小体积分装慢病毒,储存于 -80℃ 冰箱或液氮中,留取少量病毒测定滴度。

Ø 应尽量避免慢病毒反复冻融,否则会降低病毒滴度。



07/适用范围


适用于任何慢病毒颗粒的浓缩方法。



08/注意事项


1. 为了您的健康安全,请规范操作,穿戴实验服与手套开展实验;

2. 所有慢病毒操作均需在BSL2级生物安全柜中进行;

3. 本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及治疗。



09/实验案例分析


1. 使用10cm细胞培养皿培养ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line(CL110001),待细胞密度为60-70%左右开始包装慢病毒;

2. 使用ViralStars LP Lentivirus Packaging Kit(LP110-10)进行慢病毒包装(阳性对照质粒含GFP绿色荧光蛋白基因),具体包装步骤按照说明书进行;

3. 准备目的细胞:将需感染的目的细胞293T以(1-3)x104的密度接种于96孔板内,次日即可进行慢病毒感染;

4. 待病毒包装48h后,收集慢病毒上清液约9mL,300xg离心10分钟以除去细胞碎片,使用0.22μm过滤器过滤上清液至无菌容器中。

5. 取1mL病毒上清液作为浓缩前对照1*,剩余8mL病毒上清液中加入2mL本产品进行慢病毒浓缩,具体慢病毒浓缩步骤按照说明书进行,保留1mL浓缩后应弃去的上清液作为对照2#,使用800μL ViralStars LS Lentivirus Storage Solution(LS110R)轻轻重悬慢病毒颗粒,即可得到浓缩10倍的慢病毒;

6. 慢病毒感染目的细胞:将96孔板细胞弃去上清,每孔加入新鲜培养基100μL,Polybrene(LE110-01)0.2μL,浓缩后慢病毒100μL或对照1*(浓缩前慢病毒原液)100μL或对照2#(浓缩后应弃去的慢病毒上清液)100μL;

7. 继续培养细胞48h后,使用荧光显微镜观察绿色荧光强度,实验结果如图2所示。


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图2: 慢病毒感染目的细胞293T观察GFP表达情况。(左)浓缩10x慢病毒,(中)对照1*(浓缩前慢病毒原液),(右)对照2#(浓缩后应弃去的慢病毒上清液)。



10/其他相关产品

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