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稳定细胞株是具有长时间传代稳定转基因表达的细胞系

更新时间:2024-01-04 点击量:193
  稳定细胞株是指具有长时间传代稳定转基因表达的细胞系,其原理主要包括两个方面:转染外源DNA和筛选稳定转染细胞。
 
  稳定细胞株的建立需要将外源DNA转染到目标细胞中。目前常用的转染方法有瞬时转染和稳定转染两种。瞬时转染主要通过电转、化学转染或病毒载体介导的转染方式将外源DNA引入细胞中,但由于外源DNA在细胞内并不稳定,很快会被降解掉,因此瞬时转染无法实现长时间稳定的转基因表达。相比之下,稳定转染则通过将外源DNA整合到细胞染色体中(如利用病毒介导的转染),或者利用ssiRNA介导的转染来实现稳定转基因表达。这样转染的细胞在传代过程中能够保持外源DNA的整合状态,从而实现长时间稳定的转基因表达。
 
  其次,筛选稳定转染细胞是稳定细胞株建立的另一个重要环节。稳定转染细胞一般会携带有外源基因和筛选标记基因(如抗生素抗性基因)的表达载体,通过添加相应的筛选物质(如抗生素)来选择和筛选细胞中整合了外源DNA的细胞。只有在经过筛选后的细胞中,外源DNA与筛选标记基因才能稳定遗传给下一代细胞,并产生稳定表达的转基因。此外,还可以利用构建荧光蛋白标记基因(如绿色荧光蛋白)来实现绿色荧光蛋白的特异性表达,从而筛选出绿色荧光蛋白阳性的细胞。
 
  稳定细胞株的使用方法:
 
  1.通过转染细胞株,通常是采用质粒介导的转染方法,将目标基因或蛋白的表达载体导入细胞中。同时加入适当的筛选或选择抗生素,使得只有转染成功的细胞能够生存下来。经过一段时间的培养和筛选,从中筛选出稳定表达目标基因或蛋白的细胞株。
 
  2.主要应用之一是用于稳定表达外源基因的研究。研究人员可以构建和表达自己感兴趣的基因,然后将其导入目标细胞株中,以研究该基因的功能、调控机制等。利用可以实现长时间连续表达目标基因,确保实验结果的可靠性。
 
  3.还可用于蛋白的表达和功能研究。研究人员可以将感兴趣的蛋白导入中,使其在细胞内稳定表达。借助可以定量表达特定蛋白,用于酶活测定、蛋白质-蛋白质相互作用研究、信号转导途径、细胞分裂、细胞凋亡等功能研究。
 
  4.也可用于药物筛选和毒性测试。研究人员可以利用,如癌细胞株,检测不同药物或化合物的生物活性、毒性等。通过与对照组进行比较,可以评估药物的疗效或毒性,并且可以为药物开发和筛选提供参考。