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LeapWal PolyShooter 慢病毒专用转染试剂

简要描述:LeapWal PolyShooter 慢病毒专用转染试剂是一种基于阳离子高分子聚合物的新型转染试剂,优化的配方特别适合于慢病毒包装细胞系(293T、293FT等)的病毒包装,具有高效低毒、操作简单、重复性好等优点,能显著提高慢病毒载体在慢病毒包装细胞系中的包装效率,并能产生更多的重组慢病毒,具有感染效率高、感染谱广等特点。

  • 产品型号:P09210
  • 产品价格:1088¥
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-04-15
  • 访  问  量:133
详细说明:

品牌自营品牌货号P09210
供货周期现货应用领域化工,生物产业,农业,制药,综合






PolyShooterTM 

Lentivirus Transfection Reagent

Polymer Reagent For Lentivirus Packaging

 

01/产品概述


慢病毒是一种逆转录病毒,能使外源基因整合入宿主细胞的基因组,实现外源基因稳定、长期的表达,比一般的逆转录病毒具有更高的滴度和更广的宿主范围。携带外源基因的慢病毒载体与包装载体(产生病毒颗粒所需的辅助蛋白)一同转染包装细胞,即可进行病毒的包装。包装好的慢病毒为假型病毒(病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞,也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒,慢病毒中的毒性基因已被剔除并被外源性目的基因所取代),分泌到细胞外的培养基中,经过离心取得上清液后进行慢病毒浓缩,浓缩后的慢病毒液可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞后,经过反转录,整合到基因组,从而实现外源基因在宿主细胞中的表达(下图)。

 

图片1.png


LeapWal PolyShooter 慢病毒专用转染试剂,PolyShooterTM Lentivirus Transfection Reagent,是一种基于阳离子高分子聚合物的新型转染试剂,优化的配方特别适合于慢病毒包装细胞系(293T、293FT等)的病毒包装,具有高效低毒、操作简单、重复性好等优点,能显著提高慢病毒载体在慢病毒包装细胞系中的包装效率,并能产生更多的重组慢病毒,经该转染试剂包装获得的对照质粒病毒滴度可达108 TU/mL,具有感染效率高、感染谱广等特点。此外,PolyShooterTM Lentivirus Transfection Reagent可直接加入培养基中,血清的存在不会影响转染效率,这样可以减少去除血清对细胞造成的损伤。同时,转染后不需要除去转染试剂-核酸复合物或更换新鲜培养基。

 



02/产品组分

 

组分

P09210-01

P09210-05

PolyShooterTM Lentivirus Transfection Reagent

1 mL/支

1 mL x 5支

 







03/保存条件


冰袋(wet ice)运输。4℃保存,有效期6个月。-30℃至-10℃保存,有效期12个月,避免反复冻融。



 

04/产品特点


优秀的慢病毒包装效率——优化的配方特别适合于慢病毒包装细胞系的病毒包装,表现出更好的转染效率和高滴度慢病毒表达水平

细胞毒性低——作用温和,能较好地实现高转染效率与低细胞毒性之间的平衡

操作简单——在血清存在时亦具有可靠的转染效率,转染后无需去除复合物或更换新鲜培养基

具有化学成分明确、无血清、不含动物来源成分等特点,可获得高度重现性和批间可靠性

 

 


05/适用范围


LeapWal PolyShooter 慢病毒专用转染试剂优化的配方特别适合于慢病毒包装细胞系(293T、293FT等)的病毒包装,能显著提高慢病毒载体在慢病毒包装细胞系中的包装效率,并能产生更多的重组慢病毒。



 

06/实验流程概要

图片2.png

(图中所示为包装10cm皿的慢病毒所需试剂量)




07/实验步骤


(以10cm皿包装慢病毒为例,其他培养装置加样体积参考表一:转染量度标准)

1. 细胞准备

转染前一天,将4-6×106 个慢病毒包装细胞(293T、293FT、ViralStarsTM Lentivirus Packaging Cell Line(货号CL110001)等)接种到10 cm细胞培养皿中,使其在包装时密度为70%-80%,放置于37℃,5% CO2培养箱培养16 h~24 h。

Ø 细胞状态会极大影响病毒包装效率,待包装细胞应处于良好生长状态,建议使用生长处于指数期、存活率大于90% 的细胞进行慢病毒包装。

Ø 该转染试剂与ViralStarsTM Lentivirus Packaging Cell Line(CL110001)配合使用,可包装出更高滴度、更高表达水平的慢病毒。

 

2. 慢病毒包装

(1) 取4 μL慢病毒包装辅助质粒混合物(Package Plasmid Mix)加入到2 mL离心管中,加入4 μg含有目的基因的慢病毒载体质粒,轻轻混合,加入20 μL PolyShooterTM Lentivirus Transfection Reagent与质粒混合,室温孵育3分钟。

Ø 慢病毒载体质粒需根据研究基因自行构建,应使用无内毒素质粒抽提试剂盒进行质粒提取,保证质粒A260/A280比值为1.8-2.0,浓度不低于500 ng/μL。溶解后的质粒切忌反复冻融,需按照使用量进行分装并于-20℃保存。

(2) 往上述混合物中加入1.8 mL无血清无双抗的DMEM基础培养基,轻轻混匀,在室温下静置30分钟,形成转染试剂-核酸复合物。

Ø 转染试剂-核酸复合物在室温下4个小时内保持稳定。

(3) 将上述1.8 mL转染试剂-核酸复合物轻轻地逐滴均匀加入10 cm皿慢病毒包装细胞中,轻轻摇动培养皿混匀,置于37℃,5% CO2培养箱中培养产毒。

 

3. 收获病毒

(1) 转染24 h后,可选择弃去初始病毒上清液,加入10-15 mL新鲜的培养基(DMEM +10% FBS)至10 cm细胞培养皿中,置于37℃,5% CO2培养箱继续培养(此步骤可选)。

(2) 转染48 h后,收集病毒上清液,再加入10-15 mL新鲜的培养基(DMEM +10% FBS)至10 cm细胞培养皿中,置于37℃,5% CO2培养箱继续培养。

(3) 转染72 h后,观察细胞状态并拍照,进行二次病毒上清液收集,与48 h收集的上清液混合,300xg离心10分钟以除去细胞碎片,使用0.45 μm滤器过滤,过滤后的上清液可直接感染目的细胞,或使用慢病毒浓缩试剂盒(LC110R)浓缩后感染目的细胞。

Ø 切忌反复冻融病毒,冻融一次病毒滴度将降低10-20%。-80℃保存的慢病毒最好在半年内使用。

 

表一:转染量度标准

 

细胞培养装置

生长培养基   体积

(mL)

总质粒量

(μg)

PolyShooterTM Lentivirus 转染试剂

(μL)

无血清基础培养基体积(μL)

6孔板

2

2-4

5-10

400

60 mm培养皿

4

3-5

7.5-12.5

800

100 mm培养皿

10

5-10

12.5-25

1800

125 mL摇瓶

30-35

30-35

75-87.5

6000

500 mL摇瓶

120-140

120-140

300-350

24000

1000 mL摇瓶

240-280

240-280

600-700

48000

 















08/注意事项


1. 核酸质量:想要获得最高的转染效率和更低的细胞毒性,应选用高纯度、无菌、无污染、无内毒素的优质核酸。质粒中的内毒素是转染的大敌,内毒素会导致转染效率显著下降,从而影响慢病毒产量。推荐使用无内毒素质粒抽提试剂盒进行质粒提取,保证质粒A260/A280比值为1.8-2.0。同时,需合理计算质粒用量,转染过量的质粒可能会导致细胞毒性甚至死亡。


2. 包装细胞质量:细胞状态会极大影响转染效率,从而影响慢病毒质量,建议使用生长处于指数期、存活率大于90%的细胞进行慢病毒包装。该转染试剂与ViralStarsTM Lentivirus Packaging Cell Line(CL110001)配合使用,可包装出更高滴度、更高表达水平的慢病毒。


3. 细胞密度:建议细胞传代后12-24 h内、细胞密度约为70%-80%时进行慢病毒包装。在实验过程中保证相同的接种条件,确保实验数据的可重复性。


4. 质粒与转染试剂使用比例:转染复合物中DNA (total μg)与PolyShooterTM Lentivirus Transfection Reagent (μL) 的推荐比例为1:2.5。想要获得更适合您慢病毒包装体系的转染条件,可以对转染比例在1:1-1:5之间进行优化。


5. PolyShooterTM Lentivirus Transfection Reagent可用于有血清培养基的转染,并且转染前后不需要换培养基。但是,制备转染复合物时要求用无血清基础培养基稀释DNA和转染试剂,因为血清会影响复合物的形成。


6. 所有慢病毒操作均需在生物安全柜中进行。


7. 为了您的健康安全,请规范操作,穿戴实验服与手套开展实验。


8. 本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及治疗。

 



09/实验案例分析


1. 提前一天使用10 cm细胞培养皿培养ViralStarsTM Lentivirus Packaging Cell Line(CL110001),待细胞密度为75% 左右开始包装慢病毒。


2. 取4 μL慢病毒包装辅助质粒混合物(Package Plasmid Mix)加入到2 mL离心管中,加入4 μL表达GFP 的对照质粒(Control Plasmid),轻轻混合,加入20 μL PolyShooterTM Lentivirus转染试剂与质粒混合,室温孵育3分钟。


3. 往上述混合物中加入1.8 mL无血清无双抗的DMEM基础培养基,轻轻混匀,在室温下静置30分钟,形成转染试剂-核酸复合物。


4. 将上述1.8 mL转染试剂-核酸复合物轻轻地逐滴均匀加入10 cm皿慢病毒包装细胞中,轻轻摇动培养皿混匀,置于37℃,5% CO2培养箱中培养产毒。


5. 转染24 h后,弃去初始病毒上清液,加入10 mL新鲜的培养基(DMEM +10% FBS)至10 cm细胞培养皿中,置于37℃,5% CO2培养箱继续培养。


6. 转染48 h后,收集病毒上清液,再加入10 mL新鲜的培养基(DMEM +10% FBS)至10 cm细胞培养皿中,置于37℃,5% CO2培养箱继续培养。


7. 转染72 h后,观察细胞状态并拍照,进行二次病毒上清液收集,与48 h收集的上清液混合后,300xg离心10分钟以除去细胞碎片,0.45 μm滤器过滤,使用ViralStarsTM LC Lentivirus Concentration Solution慢病毒浓缩试剂盒(LC110R)进行20倍浓缩,使用1 mL ViralStarsTM LS Lentivirus Storage Solution(LS110R)重悬慢病毒颗粒。


8. 孔稀释法测定病毒滴度,使用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,并拍照记录,实验结果如图2所示。

 

图片3.png


图2:  使用PolyShooterTM Lentivirus Transfection Reagent包装的慢病毒(GFP)进行滴度检测,采用荧光显微镜检测GFP绿色荧光蛋白表达情况

 




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