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使用慢病毒浓缩试剂要注意这些小细节

发布时间:2022-10-19 点击量:57
  慢病毒浓缩试剂包括多个存储模组,存储模组包括固定座、设于固定座上的存放槽、设于存放槽底部的支撑台、设于存放槽上侧的位环;试剂管放置于存放槽内;提高了试剂管在存储以及运输过程中的稳定性。通常用于实验室、产品研发部等地方,而有时在将携带有慢病毒的试剂管存储在纯化试剂盒内后,需要将试剂盒运输至特定的区域内,在存储、运输的过程中,目前的试剂盒容易出现试剂管倾倒或与试剂盒内部产生碰撞的情况,进而导致试剂管破裂,使得试剂管内部的慢病毒溢出,进而造成严重的污染,不利于试剂管的运输以及存储。
 
  慢病毒浓缩试剂使用说明:
 
  1.收集慢病毒上清液,0.45um滤膜过滤,以除去细胞和碎片。
 
  Note:如果使用滤膜过滤,只能使用低蛋白结合力的纤维素醋酸酯或聚醚碱(PES)膜。不能用硝酸纤维素膜(NC)。
 
  2.将慢病毒上清与试剂盒中的浓缩液按照4:1的比例混合(上清液4份,浓缩液1份),4C孵育2h或过夜。刚开始时每隔30min混匀一下,进行3次。
 
  Note:若时间不宽裕,可将孵育时间缩短为几小时。慢病毒颗粒在4C可以稳定保存数天。
 
  3.于4℃,水平转子4000g离心25min。
 
  Note:角转子会将病毒离心到管壁上,仔细分辨管壁上的白色沉淀并将其冲洗下来。
 
  4.小心去除上清,不要晃动管子,一般可见白色沉淀(有时沉淀不可见)。
 
  5.用初始体积(原上清液体积)1/10-1/100的DMEM或PBS重悬病毒颗粒,小心吹打均匀,重悬沉淀物。
 
  6.测定浓缩慢病毒样品的滴度,50uL/管分装,于-80C冰箱保存。
 
  Note:慢病毒冻存液避免反复冻融,否则会降低病毒滴度。
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