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浅析考马斯亮蓝快速染液操作步骤

发布时间:2022-11-08 点击量:39
  考马斯亮蓝快速染液(Commassie Blue Fast Staining Solution)是以考马斯亮蓝G250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳胶的快速、高灵敏染色,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。是一种无毒,无刺激性气味的高度环保型染色液。该染色液只需一小时或更短时间就可以检测到低达100mg的蛋白电泳条带,而常规方法需3小时以上。本试剂盒可以进行高灵敏染色,可以清楚检测到10mg的蛋白电泳条带。
 
  考马斯亮蓝快速染液操作步骤(仅供参考):
 
  1、PAGE电泳结束后取凝胶放入约蒸馏水中,在摇床上摇动,弃液,重复上述步骤1次。
 
  2、弃蒸馏水,加入Commassie Blue Fast stai ning solution,使染色液能盖住凝胶。
 
  3、(可选)凝胶置于考马斯亮蓝快速染色液中,在水浴锅或微波炉内加热至95~100弋,立即从加热装置中取出。(此步骤可以使染色提高灵敏度或加快染色进程,亦可省略。)
 
  4、在摇床上摇动染色,蛋白量大的条带10-15min左右会出现,大部分蛋白条带会在30-60min左右出现。一般情况下,5h能获得效果。
 
  5、出现清晰的目标蛋白条带即可停止染色,弃染色液。
 
  6、加入适量的蒸馏水停止染色反应。亦可以在摇床上摇动脱色,以便减少背景干扰。
 
  7、把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨,可以把胶保存在含20%甘油水溶液中,长期保存可以制备干胶。
 
  凝胶采用蒸馏水清洗的目的在于去除凝胶中的SDS等干扰物质。如果不能充分去除SDS会导致背景较高。如果凝胶很厚,洗涤时间应适当延长、洗涤次数应适当增加。蒸馏水洗涤去除凝胶中的杂质时,如果使用经过加热或沸腾的蒸馏水,每次洗涤时间可以缩短至1~2min。染色时如果把凝胶和染色液一起放置在微波炉中适当加热,可以大大加快染色速度。但加热时宜尽量避免沸腾,以免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。

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