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Puromycin 嘌呤霉素 PS610使用说明

发布时间:2022-12-08 点击量:74
  Puromycin 嘌呤霉素 PS610是一种由链霉菌中获取的氨基糖苷类抗生素,具有与tRNA分子3’末端类似的结构,可以和核糖体的A位点结合,从而抑制蛋白质合成对革兰氏阳性菌产生抑制作用。可用作筛选含该抗生素的基因质粒,细胞株构建,也可当做抗菌类抗生素使用。
 
  Puromycin 嘌呤霉素 PS610使用说明:
 
  1.转染前一天铺HEK293细胞,培养基为含10%FBS的DMEM培养基,以6wellplate为例,细胞数目约为0.5x106cells。
 
  2.在无菌管中加入目的DNA质粒(1-2ug)及无血清的DMEM或者Opti-MEM。
 
  3.在无菌管中加入无血清的DMEM或者VGF转染试剂4-10ug。
 
  4.将2和3步中的溶液混合,室温放置20-30min。
 
  5.将4步所得混合液逐滴加入至6wellplate中。
 
  6.转染48h后,吸弃培养基,加入终浓度为1-10ug/mlPLM-Puromycin试剂的培养基2ml。
 
  7.再培养48h后,观察细胞状态,不含嘌呤霉素的细胞会飘起死亡,转入含嘌呤霉素抗性质粒的细胞则贴壁生长。再次吸弃培养基,加入终浓度为1-10ug/mlPLM-Puromycin试剂的培养基2ml,继续杀死无嘌呤霉素抗性的细胞。
 
  8.再培养48h,若细胞仍然贴壁生长且几乎长满,结果说明我们的目的质粒含有嘌呤霉素抗性基因,否则目的质粒不含嘌呤霉素抗性基因。
 
  注意事项:筛选细胞时,细胞接种密度不能过大,以免影响筛选效率。当细胞密度比较大时,可加本试剂反复筛选,直至对照细胞死亡。建议的一般哺乳动物细胞选用的有效浓度范围为1-10μg/ml,使用前要做浓度筛选,选择合适的浓度。
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